|
Количество
|
Стоимость
|
||
|
|
|||
Состав
- Планшет для ИФА с иммобилизованным инактивированным антигеном ВБА – 2 шт.;
- Концентрат (10х) раствора № 1 для промывания планшетов – 2 флакона по 50 мл;
- Концентрат раствора конъюгата пероксидазного моноклонального анти-gЕ – 1 флакон 0,5 мл;
- Раствор № 2 для разведения анти-gE-конъюгата и сывороток – 2 флакона по 30 мл;
- Положительная контрольная сыворотка, содержащая анти-gЕ-антитела (К+) – 1 флакон 1,5 мл;
- Отрицательная контрольная сыворотка, не содержащая анти-gЕ-антитела (К-) – 1 флакон 1,5 мл;
- Раствор хромогена (тетраметилбензидин, ТМБ) с перекисью водорода (раствор № 3) – 1 флакон 30 мл;
- Раствор № 4 для остановки реакции – 2 флакона по 30 мл.
целевые животные
Свиньи всех возрастных категорий.
Показания к применению
Применяют для определения инфицированных вирусом болезни Ауески свиней среди невакцинированного поголовья и среди поголовья, вакцинированного gE- отрицательной вакциной против болезни Ауески.
Противопоказания
Тест-систему не применяют для диагностики болезни Ауески у свиней, вакцинированных немаркированной gE-положительной вакциной против болезни Ауески.
Способ применения и дозы
1. Приготовление реагентов (для проведения анализа на одном планшете).
1.1. Раствор № 1 для промывания планшетов.
Для приготовления раствора для промывания планшетов (рабочего) раствор № 1 (10-кратный концентрат) интенсивно взбалтывают, разводят в соотношении 1:10 дистиллированной или деионизированной водой и еще раз взбалтывают. Если в концентрате выпал осадок из кристаллов, то его подогревают перед использованием при температуре 37°С до полного их растворения. (Например: для приготовления раствора для промывания 1 планшета необходимо смешать 50 мл раствора № 1 с 450 мл воды). Срок хранения раствора – 24 часа при температуре +4° С.
1.2. Раствор анти-gЕ-конъюгата.
Для приготовления рабочего раствора из расчета на 1 планшет следует 10 мл раствора № 2 перенести в отдельную пробирку и добавить 0,2 мл концентрата раствора aнти-gЕ-конъюгата до получения конечного разведения в рабочем растворе 1:50. Полученный раствор следует тщательно перемешать. Срок хранения раствора – 24 часа при температуре 4° С.
1.3. Раствор ТМБ с перекисью водорода (раствор № 3) и раствор № 4 для остановки реакции поставляется в готовом виде. Срок хранения растворов ограничен сроком годности тест-системы.
ВНиМАНиЕ! Раствор № 4 для остановки реакции (2 % раствор серной кислоты) может вызвать химические ожоги в случае попадания на кожу.
2. Образцы сывороток.
2.1. Для анализа необходимо 50 мкл сыворотки или плазмы крови свиней на каждую лунку планшета. Для увеличения точности анализа необходимо исследовать каждую сыворотку дважды.
2.2. Для тестирования используют свежую или замороженную до минус 20° С сыворотку (плазму) крови. Сыворотку (плазму), подвергаемую тестированию, хранят при 4° С не более 48 часов. Сыворотки, контаминированные микрофлорой, а также сыворотки, содержащие осадок, не исследуют.
2.3. Контрольные сыворотки (К+, К-) тестируют аналогично исследуемым сывороткам. Контрольные сыворотки хранят при температуре 4°С. Срок хранения контрольных сывороток ограничен сроком годности тест-системы.
3. Проведение анализа.
Перед использованием все реагенты тест-системы и сыворотки доводят до комнатной температуры и взбалтывают.
3.1. Переносят необходимое количество раствора № 2 из флакона в одноразовую ванночку. При помощи многоканальной автоматической пипетки вносят в лунки планшета с иммобилизованным антигеном ВБА по 50 мкл раствора № 2.
3.2. При помощи одноканальной автоматической пипетки вносят в соответствующие лунки планшета по 50 мкл контрольных сывороток (К+, К-). (Отрицательную контрольную сыворотку вносят в две лунки – А1, В1. Положительную контрольную сыворотку вносят в две лунки – С1 и D1). Контрольные сыворотки следует тщательно перемешать в лунке в растворе № 2 трехразовым пипетированием, не касаясь дна и стенок лунок и не допуская появления пузырьков.
3.3. При помощи одноканальной пипетки вносят в лунки планшета по 50 мкл исследуемых сывороток и тщательно перемешивают в растворе № 2 трехразовым пипетированием, не касаясь дна и стенок лунок и не допуская появления пузырьков.
ВНиМАНиЕ! Перед использованием все сыворотки тщательно перемешивают. Каждый образец сывороток отбирают отдельным наконечником.
3.4. Накрывают планшет крышкой или клейкой бумагой и инкубируют его в термостате при 37° С 2 часа.
3.5. Промывают планшет раствором для промывания планшета (рабочим) 4-5 раз. При промывании в каждую лунку вносят не менее 0,3 мл раствора для промывания. После промывания из лунок тщательно удаляют влагу, постукивая планшетом по фильтровальной бумаге.
3.6. Переносят необходимое количество раствора анти-gЕ-конъюгата (рабочего) из флакона в одноразовую ванночку. При помощи многоканальной автоматической пипетки во все лунки вносят по 0,1 мл раствора aнти-gЕ- конъюгата.
3.7. Накрывают планшет крышкой и инкубируют в термостате при 37° С 1 час.
3.8. Планшет промывают пять раз и удаляют влагу.
3.9. Переносят необходимое количество раствора хромогена (№ 3) путем переливания из флакона в одноразовую ванночку. При помощи многоканальной автоматической пипетки вносят в лунки по 0,1 мл раствора ТМБ с перекисью водорода (раствор № 3).
ВНиМАНиЕ! Посуду, которую использовали для работы с ТМБ, необходимо тщательно вымыть. Раствор ТМБ не должен контактировать с металлами, а также подвергаться действию прямых солнечных лучей.
3.10. Планшет помещают в защищенном от прямых солнечных лучей месте при температуре от 21 до 24° С на 15 минут.
3.11. Ферментативную реакцию останавливают путем внесения в лунки автоматической многоканальной пипеткой по 0,1 мл раствора № 4 (для остановки реакции). Раствор №4 добавляют в лунки в той же последовательности, что и раствор ТМБ.
3.12. Учет результатов проводят не позднее 15 минут после остановки реакции. Измеряют оптическую плотность при 450 нм в лунках с помощью многоканального спектрофотометра. Нулевой уровень спектрофотометра устанавливают по воздуху.
Внимание! На всех этапах анализа не допускают подсыхания поверхности лунок отмытых планшетов. Для этого быстро вносят следующие реагенты в отмытые лунки.
Внимание! На всех этапах инкубации и при спектрофотометрии планшета раствор в лунках не должен содержать пузырьки.